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奥林巴斯显微镜冷冻断裂装置技术解析

2012-07-20 15:38
林契于宸
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  奥林巴斯显微镜的断裂在特殊的冷冻断裂仪中进行。冷冻断裂仪有多种商品出售,其复杂程度也有很大差别,但原理都是相同的,它们都是一个真空喷镀仪和一个冷冻断裂装置组成的。现以本室的日立HHS一5GB冷冻断裂仪为例说明其原理。

  奥林巴斯显微镜的冷冻断裂装置。其主要部件有两个:刀座和样品座,均由导热良好的铜制成。刀座上安置一刀片,它可沿样品座上的导轨顺斜面下滑。样品座上可安放样品杯。当拉动塑料支撑块时,刀座下滑,将样品切断。在刀座上方与前方各有一孔,供喷铂与喷碳用。样品座上可装上蚀到加温器,使样品升温。刀座前还有一隔热板,以阻挡喷镀时的热辐射。为保证整个装置有良好的导热、滑动与切断性能,每次使用前均应认真擦拭,除去上面的油污、水份和氧化层。必要时可用抛光膏,丙酮清洗表面。

  奥林巴斯显微镜使用时,将刀座和样品座置入液氮中冷冻待液氯停止沸腾后,取出,并在室温下迅速将经过冷冻的样品连同样品杯一‘起装到样品座亡,再将刀座放在样品座导轨上方,下面垫以塑料文撑块,插攒舶入隔热板,然后将整个装置再次故人液氮冷却。待液氯沸腾停止,立即提出,放到真空明镀仪的喷镀台上,技上支撑块的拉绳,接通温度控制器,盖放真空罩开始抽真空。

  奥林巴斯显微镜真空喷铵仪内的真空度达到样品温度时,通过快门把手迅速拉动真空罩内的支撑块,刀座即从样品座的斜面上滑下,并将样品切断,在样品杯内留下一个带裂面的样品。

  有时奥林巴斯显微镜需要研究腹表面的结构,这就要使样品慢慢升温,令冰升华,把膜内外表面暴露出来,这一过程称为蚀到。蚀刻速度与温度和真空度有关。具体作法是,在样品断裂后。在的真空度下,用蚀刻加温器使样品温度慢慢升至,并在该条件下维持3一10分钟。

  奥林巴斯显微镜的断裂或蚀刻后的样品均需喷镀。喷镀的目的是在暴露的样品表面造成一个连续的,具有足够反差并富有立体感的薄膜,印制备样品表面的复型。

  奥林巴斯显微镜喷镀分两步进行。先在与样品成45度的方向通过喷铂孔喷镀。为此,先要在的真空度下,使带有钥珠的碳棒预热,再加大电流使铂在2—3秒钟内熔融气化,当刚刚出现碳花时,即终止通电。第二步为喷碳,其喷镀方向与样品表面垂直。每次喷碳时间为1秒,总计可喷4—5次。每次间隔3—4秒。间歇喷碳的目的是防止样品因过热而发生蚀刻。喷碳是为了在样品表面形成一个连续的膜。喷铂与喷碳的方向。

  以上所述的奥林巴斯显微镜冷冻超薄切片制备法适用于形态,细胞化学或免疫标记研究。制备过程中样品要通过一系列的水溶性介质,可称为湿法。湿法会使样品中的可溶性成份流失,因此不能用于这些成份的研究。为研究绍胞中的可扩散的,水溶性成份,应当使用于法制备超薄切片。

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