带你走出HPLC和UHPLC色谱柱的十大误区

2017-06-24 00:51

一、分析氨基酸的离子交换柱，使用一段时间反柱效明显下降，用NaOH活化，达不到要求，但用NaOH反冲活化可迅速恢复柱效。

二、色谱柱使用一段时间后柱效下降，此时可拆下柱入口端螺帽，去掉1-2mm被污染填料，再用相同填料填满，然后用流动相反冲一下，可使柱效恢复，因反冲可以改善柱头死空间。

三、因反冲可把沉积在过渡板上的细微颗粒冲走，有时也可用反冲技术使柱压降低。

反向使用色谱柱有一个例外，就是生产商在色谱柱的进样端使用了孔径更大筛板的情况，反向使用可能会将填料从柱床冲出。如果制造商在柱的入口处使用的是高孔隙率的玻璃料，那么将柱反冲的话，可能会将柱填料从填充床上冲洗掉。

色谱柱在工厂填装时，出口端的筛板孔径必须比色谱柱中最小颗粒的粒径还要小。譬如，色谱填料平均粒径是5μm，粒径分布范围是3-7μm，出口端筛板孔径必须小于3μm，使填料没有可能从柱床跑到色谱柱筛板外面。

大多数生产厂家选择的筛板孔径是2μm。至于某些厂家两端的柱筛板孔径不一样，一般是进样端大些，出样端小些。因此，一些制造商会在柱子标签处放置一个箭头指示，表明必须仅在一个方向上使用。可以肯定有这种可能性，所以一个色谱工作者应该好好阅读色谱柱手册或说明书，或与制造商确定这根色谱柱是否可以反冲。

误区9 色谱柱填料粒径越小、压力越高，分离效果越好

超小的粒径以及超高的柱压，并不一定是色谱工作者的最佳选择！现代色谱柱的柱特性研究已经引发出一些新方法来评估一根色谱柱的性能。例如，采用新的表面多孔材料的色谱柱，其柱效与sub-2μm UHPLC柱效一样好，然而与常规的LC填料色谱柱比起来，柱压很低。

误区10 柱压不会影响色谱分离效果

色谱的很多参数都是受柱压影响的，包括部分溶质的摩尔体积、停滞体积、柱孔隙度、保留因子、流动相密度、介电常数、固定相结构、pH值和电离常数等。为什么柱压引起了越来越多的关注呢？原因是市售的色谱仪很多是超高压色谱仪和色谱柱。

当色谱柱在约2000psi（13.789MPa）压力下运行时，即使保留时间上存在小差异，也并不会引起我们的注意；特别是如果重复性较好及定量不受影响的时候。但是，当柱压接近2000psi（13.789MPa）时，柱压的影响可能就相当明显了。

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