带你走出HPLC和UHPLC色谱柱的十大误区

2017-06-24 00:51

来源：材料与测试

比如科思美析COSMOSIL的C18-PAQ系列则可以使用100%水作为流动相，适合分离亲水型化合物，并相较于传统的十八烷基键合硅胶色谱柱，具有很强的抗酸性。

误区4 至少需要10个柱体积才能重新使LC色谱柱达到平衡

平衡时间对于梯度色谱来说是非常重要的，因为它是整个技术的限制因素。这有两种平衡类型：重复平衡和完全平衡。重复平衡也就意味着在无法实现完全平衡的情况下达到的平衡。

实际上，如果在随后的运行中，保留时间的重复性是小于0.002 min的，然后对于非离子化溶质的无缓冲洗脱剂和碱性化合物以常用的三氟乙酸和甲酸为添加剂的话，重复平衡在两个柱体积的范围内即可实现。

误区5 相较之纯的多孔粒子，表面多孔颗粒会显着降低样品容量

HPLC色谱柱填料对样品的容量是与其表面积成正比的，这与硅醇基通过单体键合形成的化学键合相的量相关。然而，研究结果表明：在相同的试验条件下，表面多孔颗粒与多孔粒子对样品的容量是基本上相同的。

误区6 UHPLC填料柱比常见的HPLC填料柱更容易堵塞

随着柱填料多孔材料粒径的不断减小，使得柱的主要硬件设计跟着一起发生变化。对于sub-2μm UHPLC柱的堵塞，是样品和流动相物质倒伏在柱入口的结果。如果你在进样前对样品进行了净化，如使用固相萃取、过滤或离心等，就可以避开任何污染问题。

误区7 保护柱是没必要的

使用保护柱有很多好处。首先，保护柱可以防止化学物质或颗粒物损坏分析柱。其次，相较之更换一根昂贵的分析柱，更换一根5mm 的保护柱只需要很少的花费。现代的保护柱具有几乎无死体积、更换快速，以及适用于UHPLC的高压等优点。

误区8 你不可以将HPLC色谱柱反接以便于冲洗掉其中的颗粒物

实际上HPLC色谱柱的填装压力比最大使用压力高很多（通常会高2倍）。如果装柱时使用了恰当的匀浆剂，并且分配一定的时间使柱床稳定，一支填装良好的色谱柱是完全可以双向使用的。

液相色谱柱上基本都有->标志，表示流动相的流动方向，有的在色谱柱上印有“Nerver Lot Flow in the Opposite Direction”字样，翻译成“决不能反冲”的意思，色谱柱可以反冲吗、色谱柱能不能反冲的问题争议很大，但在我们工作中，用色谱柱反冲技术修复色谱柱可以收到柱效提高、柱效恢复的效果。